倒置顯微鏡應用
主要儀器與試劑①倒置顯微鏡(目鏡中帶有計數(shù)框)。②樣品沉淀器由沉降柱③血球計數(shù)器。④合哥氏溶液。
試驗方法
①樣品的采集及保存
水樣采集后用魯哥氏溶液保存,100 m1.水樣加1mL獸哥氏溶液并置于暗處。
②樣品沉淀
將沉降柱置于沉降板上,使沉降柱口與沉淀室口吻合,取1-20 mL水樣注入沉降柱(操作時不要形成旋渦),然后加蒸餾水至沉降柱口,用玻片將沉降柱口封好盡量避免有氣泡產生。將沉淀器靜置4 h使水樣沉淀,移動沉淀器時要注意避免沉淀物非隨機分布。
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奧林巴斯顯微鏡
③樣品檢測
用玻片推去沉降柱及其中的上清液并將玻片蓋于沉淀室上,注意沉淀室內不能有氣泡產生。將沉淀室放入顯微鏡載物臺,用目鏡中的計數(shù)框進行長條計數(shù),統(tǒng)計經過方框內的藻類數(shù)量。隨機抽取沉淀室底板3-5條或對整個沉淀室進行計數(shù),直到優(yōu)勢種類的計數(shù)X100個/mL。
變異系數(shù)
在水樣體積及計數(shù)條帶相同的前提下,倒置顯微鏡計數(shù)法的變異系數(shù)比血球計數(shù)法小.樣品E的變異系數(shù)較大是由于其優(yōu)勢種類為微囊藻,微囊藻具有偽空泡不易被沉淀,此外通常微囊藻群體中有大量的細胞個體,在計數(shù)時很容易產生誤差。而采用血球計數(shù)法是由于細胞密度大,且不易出現(xiàn)大的群體,故變異系數(shù)較小。
準確度
采用倒置顯微鏡計數(shù)法時對整個沉淀室((s咖3IIlIll)進行隨機抽樣,而血球計數(shù)法僅對1 nm3的樣品室進行抽樣,可見在選擇了恰當?shù)乃畼芋w積和計數(shù)條帶數(shù)后,倒置顯微鏡計數(shù)法可達到較高的準確度,而血球計數(shù)法只有當水樣中含有的浮游藻類密度非常高時才能得出統(tǒng)計學上可靠的數(shù)據。在檢測的5個樣品中,除E外,其他4個樣品采用倒置顯微鏡計數(shù)法檢出的平均藻類總數(shù)高于血球計數(shù)法的結果(由于E中微囊藻細胞密度過大及其種屬特性,在沉淀室中微囊藻細胞個體處于不同的層面,計數(shù)時很容易產生誤差)。
由此可見,倒置顯微鏡計數(shù)法可檢出樣品中的大多數(shù)種屬,能較為全面地反映樣品的種群分布情況,有利于對湖泊或水庫作進一步研究。而血球計數(shù)法僅能檢出水樣中占優(yōu)勢的1-2個種群,一些常見的、數(shù)量較少的種屬則無法檢出。
采用倒置顯微鏡計數(shù)法檢測水中的浮游藻類,水樣量小、準確度高、變異系數(shù)小,能較為全面地反映樣品的種類分布情況,且操作簡單易行。檢測中應注意以下幾方面:移去上清液時沉淀室內不能有氣泡存在,以免影響計數(shù)結果;移動沉淀室時要避免傾斜,以免造成藻類在沉淀室底板非隨機分布;選取適當?shù)乃畼芋w積及計數(shù)條帶以獲得較高的準確度。