暗視野顯微鏡又被稱(chēng)作暗場(chǎng)顯微鏡，是一種通過(guò)觀察樣品受側(cè)向光照射時(shí)所產(chǎn)生的散射光來(lái)分辨樣品細(xì)節(jié)的顯微鏡。 暗視野顯微鏡適用于檢查未染色標(biāo)本的形態(tài)及其運(yùn)動(dòng)能力。

原理和結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：

暗視野顯微鏡和普通的明視野顯微鏡區(qū)別在于它們的聚光器有所不同。暗視野顯微鏡裝有一個(gè)*遮暗的聚光器，使光線(xiàn)不能通過(guò)聚光器，而只能從聚光器四周及未遮暗的部位斜射到載玻片的標(biāo)本上。同時(shí)因光線(xiàn)是斜射的，不能進(jìn)入物鏡，而使得觀察的視野也是暗的，而聚光器斜射到菌體上的光線(xiàn)，則因光的散射作用而使菌體發(fā)亮，再反射至物鏡內(nèi)，這樣在顯微鏡中則可見(jiàn)到暗視野中明亮的影像。

操作方法：

1）使用研究級(jí)暗視野顯微鏡，或?qū)⑵胀ü鈱W(xué)顯微鏡上的聚光器取下來(lái)，裝上暗場(chǎng)聚光器；

2）不論使用的是干燥物鏡還是油浸物鏡，在進(jìn)行鏡檢時(shí)都應(yīng)在聚光器的上透鏡上，加上一滴香柏油；

3）將制作好的細(xì)菌懸滴標(biāo)本片放置于載物臺(tái)上，然后上升聚光器至頂部，使油與載玻片相接觸；

4）放大光源；

5）進(jìn)行聚光器光軸調(diào)節(jié)及調(diào)焦；首先用10×物鏡找到被檢物像，然后調(diào)小聚光器虹彩光圈，直至可在視野中看到視場(chǎng)光闌的輪廓，再上下細(xì)致調(diào)整聚光器，這樣會(huì)使視場(chǎng)光闌的影像變得更為清晰，同時(shí)，如視場(chǎng)光闌不在場(chǎng)*，則可利用聚光器外側(cè)的兩個(gè)調(diào)節(jié)鈕進(jìn)行調(diào)整，當(dāng)亮光點(diǎn)到達(dá)場(chǎng)*后，再將其調(diào)大，方可進(jìn)行觀察。

注意事項(xiàng)：

1）暗視野觀察所用物鏡的數(shù)值孔徑一般適宜在1.00—1.25左右，建議使用帶視場(chǎng)光闌的物鏡，通過(guò)隨意轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡中部的調(diào)節(jié)環(huán)，可輕松改變數(shù)值孔徑的大小。

2）更要求使用的載玻片和蓋玻片必須無(wú)劃痕、無(wú)灰塵，且物鏡前透鏡也必須潔凈無(wú)塵。同時(shí)載玻片與蓋玻片的厚度也應(yīng)符合標(biāo)準(zhǔn)。

3）鏡檢時(shí)室內(nèi)的光線(xiàn)應(yīng)較暗，如果達(dá)不到這樣的條件，也應(yīng)盡量使用遮光裝置，以更好的阻止目鏡周?chē)泄饩€(xiàn)射入。

4）在進(jìn)行油鏡的鏡檢時(shí)，由于油內(nèi)的雜質(zhì)和氣泡產(chǎn)生的漫反射，可能會(huì)影響視場(chǎng)的鏡檢效果，所以必須盡量先清除掉油內(nèi)的雜質(zhì)和氣泡等。

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